Lors de sa première séance, l'Assemblée nouvellement élue, présidée par son doyen d'âge, élit sa Présidente. Cette élection, acquise pour toute la durée de la législature, a lieu à bulletin secret à la tribune de l’hémicycle. Si la majorité absolue des suffrages exprimés n'a pas été obtenue aux deux premiers tours de scrutin, au troisième tour, la majorité relative suffit et, en cas d'égalité de suffrages, le plus âgé candidat est élu.

Elle s’exprime au nom des députés de la Nation. C'est par exemple à ce titre qu'elle exprime, en séance publique, l'émotion, la condamnation, l’hommage de la représentation nationale face à certains événements d'une particulière gravité (attentats, catastrophes, disparition de personnalités...). Lorsque le Président de la République décide de réunir le Sénat et l’Assemblée en Congrès à Versailles, c’est elle qui mène et préside les débats.

La Présidente a pour première mission d’assurer la conduite des débats dans de bonnes conditions au sein de l'hémicycle et de veiller au respect du Règlement de l'Assemblée nationale. Elle est la garante de la bonne tenue des discussions et veille à la discipline et au respect des députés entre eux dans l'hémicycle. Dans ces fonctions, la Présidente peut se faire remplacer par un des six vice-présidents de l'Assemblée nationale.

Elle préside plusieurs organes dirigeants de la vie de l'Assemblée : la conférence des présidents qui fixe chaque semaine l'ordre du jour des travaux de l'Assemblée nationale, le Bureau qui règle l'organisation et le fonctionnement interne de l'Assemblée, ainsi que le Comité d'évaluation et de contrôle des politiques publiques institué en 2009. La Présidente de l’Assemblée nationale nomme un membre du Conseil constitutionnel lors de chaque renouvellement triennal de ce dernier (article 56 de la Constitution). Elle nomme deux des six personnalités appelées à siéger au sein des formations du Conseil supérieur de la magistrature (article 65 de la Constitution).

Outre les nominations auxquelles elle procède en vertu de la Constitution, la Présidente de l’Assemblée nationale nomme un ou plusieurs membres de différents conseils et autorités administratives indépendantes. Par ailleurs, certains textes lui confient le soin de nommer un ou plusieurs députés pour siéger au sein d’organismes dans lesquels la représentation des assemblées parlementaires est prévue.

Elle représente l’institution parlementaire lors de ses déplacements officiels nationaux. Elle assure également la représentation de l'Assemblée dans les cérémonies officielles et dans certaines instances internationales (coprésidence du groupe français à l'Union inter-parlementaire ; conférence des présidents des assemblées parlementaires européennes, sommets des présidents des Parlements du G7). Elle accueille fréquemment à l'Hôtel de Lassay des hôtes importants, chef d'Etat ou membres de gouvernement étrangers en visite officielle à Paris. Elle peut avoir un rôle actif sur la scène internationale. Certaines initiatives peuvent avoir un impact fort auprès des opinions ou déboucher sur des initiatives importantes (création d'une assemblée parlementaire franco-allemande).